人支氣管成纖維細(xì)胞是氣道與外界環(huán)境接觸的一道屏障，在慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機(jī)制中均起著重要的作用，逐漸受到人們的重視。支氣管上皮細(xì)胞不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細(xì)胞，還作為效應(yīng)細(xì)胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)，而體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細(xì)胞由于與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上存在很大的相似性，支氣管上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)成為研究呼吸道上皮功能的必要條件。

　　人支氣管成纖維細(xì)胞試驗(yàn)方法：

　　1.體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞株，人胚肺成纖維細(xì)胞株，并建立人支氣管上皮細(xì)胞與人胚肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)體系。

　　2.BRS-3激活、O3應(yīng)激支氣管上皮細(xì)胞后與肺成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，用MTT比色法檢測(cè)肺成纖維細(xì)胞及支氣管上皮細(xì)胞的增殖活性，羥脯氨酸試劑盒檢測(cè)成纖維細(xì)胞膠原合成的狀況。

　　3.為初步探討支氣管上皮細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)成纖維細(xì)胞的作用介質(zhì)，收集支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)上清液，ELISA法及放射免疫分析法檢測(cè)TGF-β1、TNF-a、PGE2含量，并觀察其時(shí)間變化以及其含量與成纖維細(xì)胞活動(dòng)的關(guān)系。

　　4.為證實(shí)共培養(yǎng)效應(yīng)的重要介質(zhì)為TGF-β1，TGF-β1反義寡核甘酸（ASO）設(shè)計(jì)，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，MTT法檢測(cè)TGF-β1ASO轉(zhuǎn)染的支氣管上皮細(xì)胞對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖活性。

　　5.為觀察支氣管上皮細(xì)胞TGF-β1表達(dá)是否受與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)的影響，用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)單獨(dú)培養(yǎng)的HBECs與共培養(yǎng)的HBECS TGF-B1表達(dá)差異，并進(jìn)行定量分析。